毛细管电泳(毛细管电泳结果分析)-趣虎号

琼脂糖凝胶电泳与毛细管电泳的区别是什么

凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就兄弯是说，电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等，从而降低了对流运动，故电泳的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩擦系数是分子的大小、极性及介质御轿粘度的函数，因此根据分子大小的不同、构成或形状的差异，以及所带的净电荷的多少，便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离开来。在生理条件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子状态，从这种意义上讲，DNA和RNA多核苷酸链可叫做多聚阴离羡拆闷子(Polyanions)。因此，当核酸分子被放置在电场中时，它们就会向正电极的方向迁移。由于糖-磷酸骨架结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因而它们能以同样的速度向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，DNA分子的这种迁移速度，亦即电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构型，分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DN**段的基本原理。

毛细管电泳（capillary

electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（high

performance

capillary

electrophoresis，HPCE），是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容，它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为可能。长期困扰我们的生物大分子如蛋白质的分离分析也因此有了新的转机。

毛细管电泳法的特点;优点

1、电泳柱效更高，可达105m-1～106m-1，分离速度更快，在几十秒至几烂敏十分钟内即可完成一个试样的分析。

2、溶剂和试样消耗极少，试样用量仅为纳升级。

3、没有高压泵输液，因此仪器成本更低。

4、通过改变操作帆升模式和缓冲溶液的成分，毛细管电泳有很大的选择性，可以对性质不同的各种分离对象进行有效的分离。

毛细管电泳法使用注意事项

对于实验结果的可靠性和重现性，毛细管的冲洗起到了至关重要的作用，每一次冲洗都必须认真地完成，冲洗时间不允许缩短或者不冲洗。

将实验做完以后一定要使用水对毛细管进行冲洗，不然毛细管可能会被堵塞,使得实验结果受到严重地影响，希望引起足够的重视。

在对毛细管进行冲洗的时候，不要将电压加在毛细管上，讲义上给定的工作电压不允许更改，也不建议对饥轿枝进样时间加以改变。

以上内容参考百度百科-毛细管电泳法

毛细管电泳的分类

分离模式

毛细管电泳根据分离模式不同可以归结出多种不同类型的毛细管电泳，见表1。毛细管电泳的多种分离模式，给样品分离提供了不同的选择机会，这对复杂宴瞎样品的分离分析是非常重要的。

表1毛细管电泳类型类型缩写说明 1单根毛细管毛细管区带电泳 CZE毛细管和电极槽灌有相同的尺滚缓冲液毛细管等速电泳 CITP使用两种不同的CZE缓冲液毛细管等电聚焦 CIEF管内装pH梯度介质，相当于pH梯度CZE胶束电动毛细管色谱 MEKC在CZE缓冲液中加入一种或多种胶束微乳液毛细管电动色谱 MEEKC在CZE缓冲陵祥余液加入水包油乳液高分子离子交换毛细管电动色谱 PICEC在CZE缓冲液中加入可微观分相的高分子离子开管毛细管电色谱 OTCEC使用固定相涂层毛细管，分正、反相于离子交换亲和毛细管电泳 ACE在CZE缓冲液或管内加入亲和作用试剂非胶毛细管电泳 NGCE在CZE缓冲液中加入高分子构成筛分网络 2单根填充管毛细管凝胶电泳 CGE管内填充凝胶介质，用CZE缓冲液聚丙烯酰胺

毛细管凝胶电泳 PA-

CGE管内填充聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖毛细管凝胶电泳 Agar-

CGE管内填充琼脂糖凝胶填充毛细管电色谱 PCCEC毛细管内填充色谱填料，

毛细管电泳(毛细管电泳结果分析)(图1)

分正、反相于离子交换等 3阵列毛细管电泳 CAE利用一根以上的毛细管进行CE操作 4芯片式毛细管电泳 CCE利用刻制在载玻片上的毛细通道进行电泳 5联用毛细管电泳/质谱 CE/MS常用电喷雾接口，需挥发性缓冲液毛细管电泳/核磁共振 CE/NMR需采用停顿式扫描样品峰的测定方法毛细管电泳/激光诱导荧光 CE/LIF具单细胞、单分子分析潜力 2.操作方式

毛细管电泳仪

毛细管电泳可以按操作方式重新分为手动、半自动及全自动型毛细管电泳。

3.分离通道形状

按分离通道形状分为圆形、扁形、方形毛细管电泳等。

4.缓冲液的介质

根据配制缓冲液的介质的不同，可以把CE分为水相毛细管电泳和非水毛细管电泳（NACE）。NACE是以有机溶剂作介质的电泳缓冲液代替以水为介质的缓冲溶液，增加了疏水性物质的溶解度，特别适用于在水溶液中难溶而不能用CE分离的物质或在水溶液中性质相似难以分离的同系物，拓宽了CE的分析领域。

毛细管电泳的特点

毛细管电泳通常使用内径为25-100μm的弹性（聚酰稿茄宽亚胺）涂层熔融石英管。标准毛细管的外径为375μm，有些管的外径为160μm。毛细管的特点是：容积小（一根100 cm×75μm管子的容积仅4.4μL）；侧面/截面积比大，因而散热快、可承受高电场（100-1000 V/cm）；可使用自由溶液、凝胶等为支持介质；在溶液介质下能产生平面形状的电渗流。

由此，可使毛细管电泳具备如下优点：

（1）高效塔板数目在105-106片/m间，当采用CGE时

，塔板数目可达107片/m以上；

（2）快速一般在十几分钟内完成分离；

（3）微量进样所需的样品体键亮积为nL级；

（4）多模式可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器；

（5）经济实验消耗不过几毫升缓冲溶液，维持费用很低；

（6）自动CE是目前自动化程度较高的分离方法。

毛细管电泳的缺点是：

（1）由于进样量少，因而制备能力差；

（2）由于毛细管直径纳咐小，使光路太短，用一些检测方法（如紫外吸收光谱法）时，灵敏度较低；

（3）电渗会因样品组成而变化，进而影响分离重现性。